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水中粪大肠菌群的常见检测方法

1、聚合酶链式技术

提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA，利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ***（β-半乳糖苷酶***）和约150BP的UdiA***（β-D-半乳糖苷酶***）的DNA，分别检测大肠菌群数和大肠。

2、荧光原位杂交技术

由于粪大肠菌群特异的DNA序列，借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交，将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析，确定菌群数。

固定底物技术酶底物法(DefinedSubstrateTec

固定底物技术酶底物法（Defined Substrate Technology）采用大肠菌群***能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈***，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。固定底物技术酶底物法可以选用中推荐粉状培养基（西安立科公司的酶底物***）来进行简便的操作；无需确认试验；固定底物技术酶底物法检测时间短，只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。

酶底物(英语:substrate)在生***学领域指参与生化反

酶底物（英语：substrate）在生***学领域指参与生化反应的物质，可为化学元素、分子或化合物，经酶作用可形成产物，一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种***分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测***中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为***。大肠使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

大肠菌群的MPI计数检验方法

大肠菌群的MPI计数

检验方法

选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管MUGal肉汤管，每管接种1mL(如接种量超过1mL，则用双料MUGal肉汤管)，同时另取2支MUGal肉汤管(或双料MUGal肉汤管)加入与样品稀释液等量的上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)作空白对照。将接种后的培养管置干37+1℃培养箱培养18h-24h。将培养管置干暗处，用波长366nm的紫外光灯照射，如显蓝色荧光，为大肠菌群阳性管;如未显蓝色荧光，则为大肠菌群阴性管。培养基检验原理:胰蛋白胨提供碳源和氮源满足***生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氯钾和磷酸氦二钾是培养基pH缓冲剂:月桂基***钠可以***革兰氏阳性菌的生长;大肠菌群可产生一半乳糖苷酶，分解液体培养基中的酶底物4--B-D-半乳糖苷MUGal，使4-游离，在波长366nm紫外灯照射下呈现蓝色荧光。

培养基用法:称取本品307克，加热搅拌溶解于1000mL蒸馏水中，分装于20mmx150mm试管中，每管9mL，116℃高乐灭菌10分钟，待培养基冷却后，以无菌操作干每管培养液内加入01mL经无菌水稀释的500ug/mL磺啶液，备用。